论蛋黄卵磷脂的纯化及含量的测定

摘 要：采用柱层析的方法对提取的卵磷脂进行纯化，用消化定磷法测定卵磷脂的含量。结果表明，从蛋黄提取的卵磷脂粗品经柱层析纯化，精制卵磷脂的纯度达99.6%。用消化定磷法可以准确测定卵磷脂的含量，有较高的准确度。

关键词：卵磷脂；纯化；含量；测定

1  引言

   卵磷脂又称为磷脂酰胆碱，是磷脂酸的衍生物，由甘油与脂肪酸和磷酸胆碱结合而成。卵磷脂广泛分布于动物、植物和酵母中。卵磷脂是构成细胞等生物膜、脑组织和神经组织的重要组成成分^[1]，对酶的活性也起重要的作用，而且也是乙酰胆碱的重要供给源^[2]。卵磷脂因为其乳化特性和安全性，可用于生产人工血浆、脂乳剂。临床上可用于治疗动脉粥样硬化、脂肪肝、神经衰弱、营养不良、胆固醇结石的防治药物及静脉注射脂肪乳的乳化剂。在食品、化妆品和医药领域有着广泛的用途。

   目前，卵磷脂的来源主要是从鸡蛋黄、大豆和猪脑中提取。传统提取卵磷脂的几种方法，如用二甲醚从生蛋黄中提取卵磷脂、用乙醇和酸类从生蛋黄中提取卵磷脂、用丙酮提取卵磷脂和冷冻蛋黄，用乙醇和己烷将卵磷脂与中性脂进行分离，提取卵磷脂等方法，这些方法    提取的卵磷脂达不到食品和医用的高纯度^[3]，因此，必须对粗产品或市售的卵磷脂进行纯化。在本工作中，作者采用柱层析的方法对提取的卵磷脂进行纯化，用消化定磷法测定卵磷脂的含量。

2  实验部分

2.1  试剂和仪器

   蛋黄卵磷脂（卵PC）（自提）；中性三氧化二铝（200-300目）；硅胶G；氯仿（AR）；甲醇（AR）；乙醚（AR）；浓硫酸（AR）；钼酸铵（AR）；30%过氧化氢（AR）；磷酸二氢钾（AR）；层析柱（Ф15cm，L 40cm）；紫外检测仪（自制）；台式平衡记录仪（上海大华仪表厂）；分光光度计（日本岛津）；EYELA SB-2000旋转蒸发仪（上海EYELA有限公司）。

2.2  实验方法和结果

2.2.1  蛋黄卵磷脂的提取

   取12克蛋黄置于150 mL的锥型瓶中，加入35 mL乙醚，搅拌10 min，放置20 min，过滤，于45 ^oC的条件下，用旋转蒸发仪蒸干乙醚，再放入真空干燥器减压干燥20 min，彻底除尽乙醚，粗提取物离心10 min，取出下层的卵磷脂，约为2克。

2.2.2  蛋黄卵磷脂的精制

   在层析柱中装入25克中性三氧化二铝为固定相，将1克提取的卵磷脂溶于氯仿，以9:1（V/V）的氯仿:甲醇为洗脱液，紫外检测仪接台式平衡记录仪监测收集第二组分^[4]，在氮气气氛中旋转蒸干洗脱液得精制的卵磷脂0.6克，充氮气冰箱保存。经过精制的卵磷脂用硅胶G板薄层检验只有一个斑点。

2.2.3  卵磷脂含量的测定

标准曲线的绘制：用消化定磷法测定卵磷脂的含量。按表1中的数据娶浓度为5.718mg/mL的磷酸二氢钾标准溶液于小离心试管中，各加入0.5mL 5mol/L的硫酸，于150-160 ^oC的烘箱中消化3小时，冷却，加入30%的过氧化氢两滴继续消化1小时，冷至室温，加入4.6 mL0.22%的钼酸铵溶液，再加0.2 mLFSR试剂，于100 ^oC水浴上加热7min，于室温下于810nm测定吸光度A，结果列入表1。

样品的测定：同法测定测定卵磷脂的吸光度，通过回归方程求得卵磷脂中磷的含量，按卵磷脂的摩而质量即可求得卵磷脂的含量。用消化定磷法测定精制卵磷脂的纯度达99.6%。

                 表1         消化定磷法的标准曲线数据

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No        1        2        3         4         5         6        7

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KH₂PO₄ / m l   0.00      0.50     1.00      1.50       2.00       2.50     3.00

KH₂PO₄ /μg   0.000     2.859    5.718     8.577      11.44      14.30    17.15

P/μg       0.000     0.652    1.303     1.955      2.606      3.025    3.909

A         0.000     0.094    0.210     0.334      0.450      0.560    0.675

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回归方程为：Y = 0.1753X ―0.01072   R² = 0.9964

3  结论

采用柱层析的方法对提取的卵磷脂进行纯化，精制卵磷脂的纯度高，可达到食品和医用要求的高纯度。用消化定磷法可以准确测定卵磷脂的含量。

参考文献

[1] Gregoriadis, G., et al: Liposome Technology Vol. I Chapter 18,252-254

[2] 宋启煌，叶云. 超临界CO₂卵磷脂的研究. 广东化工. 1999，26（2）：37-38

[3] 张建华，刘荣春. 卵磷脂的提取的实验研究. 中国药业. 1998，7（7）：38-40

[4] The journal of the American oil chemists’ society 1965, 42: 53-56