论蔗糖合成甜味剂——三氯蔗糖的测定方法

摘   要:采用高效液相色谱法，Sugar-Pak^TM1色谱柱，以二次水为流动相，示差折光仪为检测器，外标法进行定量分析，测定三氯蔗糖含量，相对标准偏差为0.11%(n=5)，线性相关系数为0.99990，最小检测浓度为0.2µg/mL。该方法准确、可靠且无毒，是测定三氯蔗糖含量的有效方法。

关键词: 三氯蔗糖，高效液相色谱法，Sugar-Pak^TM1色谱柱

作者简介：王桂华，男，２８岁：研究生学历，在广州甘蔗糖业研究所工作，研究方向：糖品检测和标准化。

三氯蔗糖是以蔗糖为原料经氯代而制得的一种非营养型强力甜味剂，其化学名4，1’，6’—三氯—4，1’，6’—三脱氧半乳型蔗糖。目前三氯蔗糖已广泛应用于饮料、口香糖、乳制品、蜜饯、糖浆、面包、糕点、冰淇淋、果酱、果冻、布丁等加工食品中。另外，三氯蔗糖是一种新型非营养性甜味剂^[1，2]，是肥胖症、心血管病和糖尿病患者理想的食品添加剂，因此它在保健食品和医药中的应用不断扩大。我国卫生部在1997年颁发的《食品添加剂使用卫生标准》规定，可在饮料、酱菜、复合调味剂、配制酒、冰淇淋、糕点、水果罐头、饼干及面包中使用该产品，允许添加量为0.25g/kg，在改性口香糖、蜜饯中的添加量为1.5g/kg。 　

由于目前食品添加剂三氯蔗糖含量的检测无标准或行业标准方法,相关的报导较少。我们用Waters高效液相色谱仪，以Sugar-Pak^TM1为色谱柱,水为流动相，示差折光检测器检测,外标法进行定量分析,建立了三氯蔗糖的含量测定方法, 该方法简便，可靠且无毒，分离效果好,适用于生产过程及其应用厂家的监测。　

1  实验部分

1.1  仪器和试剂

Waters1525HPLC, Waters2414示差折光检测器, Waters Empower色谱管理软件；二次水（0.45µm水相滤膜过滤），三氯蔗糖标样（美国SIGMA公司）。

1.2  色谱条件

     色谱柱：Waters Sugar-Pak^TM1（6.5×300mm）；流动相：二次水（0.45µm水相滤膜过滤）；流速：0.5mL/min；进样量：10µL；柱温：90℃；检测器：2414示差折光检测器。

1.3  标准溶液配制

准确称取约50mg的三氯蔗糖标准品于50ml容量瓶中，用二次水溶解并定容，所得溶液用0.45µm水相滤膜过滤，滤液备用，浓度为1000µg/mL。

1.4  样品准备

分别称取样品1、样品2、样品3约 1g的样品于3个25mL烧杯中,用二次水溶解，处理后移入50mL容量瓶中，并定容,试液用0.45µm水相膜过滤,滤液备用。

2  结果

2.1  色谱图

       在上述色谱条件下，三氯蔗糖在色谱柱上的保留时间是11.79min。图1为三氯蔗糖标准样品的色谱图。

2.2  工作曲线的绘制

精密配制三氯蔗糖系列标准溶液，其含量依次为5.0、10.0、15.0、20.0、40.0µg/mL。按上述色谱条件进行测定,以峰面积A对浓度C（µg/mL）作线性回归方程，相关系数R为0.99990（n=5），最小检测浓度为0.2µg/mL。

图1   三氯蔗糖色谱图

2.3  精密度试验

      精确吸取样品1滤液5份，按上述色谱条件进行测定,三氯蔗糖测定结果的RSD为0.11%。

2.4  回收率试验

     将样品（三氯蔗糖测定含量为50.80%）配制成1µg/mL的溶液，分别与0.5µg/mL、1.0µg/mL、1.5µg/mL三氯蔗糖标准样品溶液，（各两份）等量混合后，在上述色谱条件下进行测定，结果如表一所示。

 表一  三氯蔗糖样品回收率试验

样品	原有量（mg）	加入量（mg）	加标后测得量（mg）	回收率（%）	平均回收率（%）
1	0.508	0.500	1.009	100.2	100.5
	0.508	0.500	1.006	99.6
2	0.508	1.000	1.514	100.6
	0.508	1.000	1.503	99.5
3	0.508	1.500	2.021	100.9
	0.508	1.500	2.000	99.5

3 讨论

结果表明，采用高效液相色谱法，用Sugar-Pak^TM1色谱柱，以二次水为流动相，示差折光仪为检测器，外标法进行定量分析，测定三氯蔗糖含量，相对标准偏差为0.11%(n=5) ，线性相关系数为0.99990，最小检测浓度为0.2µg/mL。该方法简便、可靠且无毒，是测定三氯蔗糖含量的有效方法。