用固相萃取和高效液相色谱法测定烟草中糖的研究（图）

发布时间：2022-03-04 15:16:32 浏览数：次

摘要　本文研究了用固相萃取和高效液相色谱法测定烟草中糖的方法。烟草中的糖用水超声震荡浸取；然后用Waters Sep-pak C18固相萃取小柱预分离，以Waters Carbohy-drate糖分析柱为固定相分离，75%乙腈为流动相分离，示差折光检测器检测测定。方法用于几种烟草样品中糖含量的测定，结果令人满意。

　　关键词　高效液相色谱法　糖　烟草

　　1　引言

　　烟草中的水溶性糖主要有葡萄糖、果糖、蔗糖、半乳糖和麦芽糖等，它们是影响烟草吸味的最重要化学成分之一[1,2]，目前烟草中的糖的测定方法主要有氧化还原滴定法，分光光度法，连续流动分析和高效液相色谱法等[3]。但是氧化还原滴定法和分光光度法只能测糖的总量。液相色谱法是较可靠的糖测定方法，我们曾研究过用Waters Sugar-Pak-1糖分析柱测定烟草中的糖，但蔗糖和麦芽糖不能完全分离[4]。本实验研究了用Waters Carbo-hydrate糖分析柱分离测定了烟草样品中的葡萄糖、果糖、蔗糖、半乳糖和麦芽糖，五种糖均能达到基线分离。并建立了用水超声浸取，固相萃取预分离的样品前处理方法，获得了满意结果。

　　2　实验部分

　　2.1　主要仪器和试剂

　　美国安捷伦公司高效液相色谱仪，HP1100四元泵，HP1100自动进样器，HP 1100示差折光检测器和色谱工作站；色谱纯乙腈（Fisher公司生产）；蔗糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、果糖标准（Fluka公司生产，含量（99%）。

　　2.2　色谱条件

　　色谱柱：Waters Carbohydrate色谱柱（4.6×250mm，4μm）；流动相为75%乙腈，流速为1.5 ml/min；柱温35℃；进样量20μL。

　　2.3　样品处理

　　准确称取烟草样品约0.500克，用50mL水在40-50℃下超声萃取30min，过滤，弃去最初的约10mL滤液，收集后面的滤液。取5mL通过预活化好的Sep-Pak C18固相萃取小柱，弃去最初的2mL，收集后面的3mL用4.5μm滤膜过滤，取20μL进样分析；在该条件下，标样和烟草样品的色谱图见图-1。

　　3　结果与讨论

　　3.1　检测器的选择

　　由于待测定物在紫外光区无吸收，而且待测物在样品中的含量较高，故选用示差折光检测器检测。

　　3.2　流动相和柱温的选择

　　Waters Carbohydrate钙型阳离子交换柱为分离糖和多羟基化合物专用柱，该柱用75%的乙腈水溶液作流动相，柱温要求控制在（35±5）℃之间，实验选用柱温为35℃。

　　3.3　样品前处理

　　烟草样品中的糖一般按文献[3]的方法用80%乙醇提取，该方法需用醋酸铅沉淀单宁，蛋白质等干扰物，过量的铅还需用草酸钾除去，操作麻烦。

　　我们试验了新的样品前处理方法，由于待测的几种糖都易溶于水，所以实验选用水为提取剂。试验了振荡浸取和超声浸取对糖提取率的影响，在相同时间内超声浸取溶出率明显高于振荡浸取，故实验选用超声浸取，室温下糖溶出慢，升高温度可加速糖的溶出，但温度过高（超过60℃）会加快蔗糖和麦芽糖水解，使蔗糖和麦芽糖回收率偏低，且葡萄糖，果糖回收率偏高；故实验选择浸取温度为40～50℃，在该温度下超声浸取25min以上可使糖完全溶出（收集残渣再浸取一次，浸取液中已检不出糖糖），故实验选用超声浸取30min。糖提取液应在最好当天测定，如放置过夜会因多糖水解导致葡萄糖测定结果稍有偏高。

　　烟草样品提取液中除了糖外，还含有少量其它成分，如单宁、多酚、蛋白质、油脂等。这些物质易腐蚀色谱柱且影响分离，所以在进样之前要预分离这些成分。我们采用Sep-Pak C18固相萃取小柱预分离单宁、多酚、蛋白质、油脂等成分。用Waters SPE真空提取装置，每次可同时处理20个样，小柱活化和样品富集的流速均为10ml/min，小柱用5ml乙醇浸润，再用10ml水洗去乙醇，样品以10ml/min的流速通过小柱，弃去最初的2ml，收集后面的3ml用4.5μm滤膜过滤，取20μl进样分析，这样可有效地除去单宁、多酚、蛋白质、油脂等水难溶成分和颗粒成分。

　　3.4　回归方程、相关系数及检测限

　　分别配制浓度约为5mg/ml，l mg/ml，0.2mg/ml，0.04mg/ml的标准溶液，进样后计算出不同浓度的峰面积，计算出回归方程。回归方程为见表1。根

　　

表1　回归方程、相关系数及检测限组分

　　据信燥比S/N=3，测得个组分最低检测浓度，结果见表1。

　　

表2　方法精密度及回收率

　　2.5　回收率实验及精密度取烟草样品按本文2.3处理，在相同色谱条件下测定5，结果见表2

　　2.6　样品分析及结果用本方法测定了六种烟草样品中的糖，各糖回收率在98-102%之间，相对标准偏差在0.55-0.82%之间。结果令人满意。

　　4　结　论

　　本方法用Waters Carbohydrate色谱柱高效液相色谱法测定烟草样品中的糖，并用水超声浸取提取样品中的糖，方法简便快速，结果可靠，样品可实现批量处理，可满足大量样品分析的要求，提高了工作效率。

　　参考文献：

　　1　金闻博，戴亚编著.烟草化学.　北京：清华大学出版社，1993，12

　　2　李汉超，王淑娴.　烟草、烟气化学及分析.　郑州：河南科技出版社.1991，322

　　3　张槐苓，葛翠英等编.烟草分析与检验.　郑州：河南科技出版社.1994，72

　　4　施红林；王保兴；杨光宇；黄海涛；李忠；蒋次靖.高效液相色谱法测定烟草中的糖.分析化学.2002，30（3）：384

　　Determination of Sugar in Tobacco By Solid Phase Extraction High Performance Liquid Chromatography Method
　　Fang Hongyun Wang Lu Li Zhong Chen Zhangyu Shi Honglin
　　（Yunnan Academy of Tobacco Science Kunming 650106）
　　Abstract: A high performance liquid chromatography （HPLC） method for the determination sugar in tobacco was studied. The sugars were extracted from tobacco with water and purified by solid phase extraction with Sep-Pak-C18 cartradge. Sucrose, maltose, glucose, lactose and fructose were separated on a Waters Carbohydrate （6.5×300 mm） column, with 75% acetonitrile solution as mobile phase and detected with a refractive index detector system. This method can be applied to the determination of sugar in tobacco with good result.
　　Key words: high performance liquid chromatography （HPLC） sugar tobacco

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　　一、2004年第一期目录页中“2004年1月出版”应为“2004年3月出版”，　“总第19期”应为“总第20期”。
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