FAPα在喉咽鳞癌中的表达及其与肿瘤的临床关系

[摘要] 该研究应用免疫组织化学方法对60例喉咽鳞癌患者的癌旁正常组织和癌组织标本中FAP的表达水平进行半定量检测，观察FAP表达情况与喉咽鳞癌临床病理学参数之间的关系，以探讨喉咽鳞癌组织中成纤维细胞活化蛋白（FAP）的表达水平及其与喉咽鳞癌发生、侵袭和转移是否有相关性。

[关键词] FAPα；喉咽鳞癌；免疫组化

[中图分类号] R739.6 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）02（a）-0079-02

喉咽癌作为预后极差的头颈部恶性肿瘤，具有生长部位隐袭，生物学行为恶劣，易发生颈淋巴结转移的特点，主要为鳞状细胞癌。研究发现，成纤维细胞活化蛋白α（FAPα）作为一种膜结合抗原，存在于增生性成纤维细胞表面，在上皮性肿瘤的演进、侵袭、调控成纤维细胞生长及组织修复过程中起一定的作用。本实验通过观察FAPα在喉咽鳞癌中的表达，分析其与喉咽癌生物学行为的关系，以期为肿瘤治疗提供新的途径。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

实验组：该实验的研究标本取材：青岛大学医学院附属医院耳鼻咽喉-头颈外科于2005年1月—2008年1月手术切除的喉咽鳞状细胞癌存档标本60例；并符合以下条件：①术前未接受放、化疗及任何生物治疗；②原发于喉咽部位，病理确诊为喉咽部鳞状细胞癌；③临床病历记录、病理资料齐全，病理蜡块保存完好；④以颈淋巴结清扫术后病理为依据确定颈淋巴结是否有转移。女2例，男58例，年龄区间44～74岁，平均年龄57.88岁（中位数56岁）。临床分类：环后癌2例，下咽后壁癌4例，梨状窝癌54例；临床分期：Ⅰ期1例，Ⅱ期2例，Ⅲ期11例，Ⅳ期46例（ⅣA41例，ⅣB5例）。病理分级：低分化21例，中分化35例，高分化4例。其中54例行颈淋巴结清扫术，术后病理确诊有50例淋巴结转移，10例无淋巴结转移；6例未行颈淋巴清扫术，随访2～3年，其中未发现淋巴结转移2例，有淋巴结转移4例。失访2例，该研究作为无淋巴结转移病例统计。对照组选取喉咽癌切除术中肿块旁正常组织（肿瘤边缘外1.0～3.0 cm以上，经病理证实无癌变组织）。

1.2 主要试剂

一抗为兔抗人单克隆抗体FAPα，与一抗相容的通用二抗。

1.3 实验方法、结果判定及图像分析

所有标本均同时选取肿块旁正常黏膜组织、肿瘤组织。常规固定，脱水，包埋，切片，染色。以细胞膜和（或）细胞浆中可见清晰棕黄色颗粒作为阳性判断标准。染色结果半定量判定采用阳性细胞数所占百分比表示， FAP阳性细胞率≤5%为（-），6%～25%为（+），26%～50%为（++），>50%为（+++），>25%示为高表达。以上在临床和病理资料双盲的情况下经两位有经验的病理医师评估。然后将图像摄入计算机，加以裁剪、分割、过滤和提取。在VIDAS图像分析仪支持下分析其图像的积分光密度（iOD），iOD的值表示抗原的表达水平，抗原表达水平越高，iOD值越大，反之亦然。相同方法观测癌旁正常组织。

1.4 统计方法

应用SPSS13.0软件对数据进行统计分析。FAPα在癌旁正常组织和喉咽鳞癌临床分期、病理分期及有无淋巴结转移中的表达进行分析，计量数据进行t检验。FAP在喉咽鳞癌高分化、中分化、低分化组织中的表达采用Newman-Keuls法进行两两比较。采用Spearman等级相关分析对各检测指标与临床病理因素的关系。

2 结果

2.1 FAPα在癌旁正常及喉咽鳞癌组织中的分布

FAPα主要位于细胞膜，在成纤维细胞的细胞膜和胞浆中呈棕黄色或棕褐色的颗粒或团块状，部分细胞核中也有少量分布，在癌旁正常组织中呈阴性表达；60例喉咽癌组织中34例（+），18例（++）。

2.2 喉咽鳞癌组织中FAPα的表达

FAPα在喉咽鳞癌组织中主要表达于肿瘤间质成纤维细胞胞质内，该实验在半定量测试中平均积分光密度测试未观察到FAPα与肿瘤分化程度有明显相关性，差异无统计学意义（P>0.05）。见图1、2。

① ②

图1 FAPα在中分化喉咽鳞癌表达（DAB×200）；

图2 FAPα在癌旁正常组织中的表达（DAB×200）

2.3 喉咽鳞癌中FAPα的表达与临床特征的关系

FAPα在正常组织中无表达，在喉咽鳞癌组织中呈高表达，差异有统计学意义（P<0.01）。随着肿瘤的生长、浸润程度的增加、淋巴结的转移，FAPα的表达明显增加，差异有统计学意义（P<0.01）。与肿瘤的大小、临床分期及颈部淋巴结转移有明显正相关性（r=0.721， r=0.811， r=0.756）。见表1。

表1 CK13、FAPα的表达与临床病理指标间的Spearman等级相关结果分析

[FAPα ＼&肿瘤大小＼&病理分级＼&临床分期＼&淋巴转移＼&r＼&+0.7211）＼&0.0332）＼&+0.8111）＼&+0.7561）＼&]

注： r 相关系数 1）P<0.01，2）P>0.05。

3 讨论

局部侵袭和转移是恶性肿瘤最显著的生物学特性。近年发现，肿瘤相关成纤维细胞（简称CAFs） 是构成肿瘤基质的主要成分，对肿瘤的发生发展起到了显著的支持作用，表现在促进肿瘤快速生长、浸润、转移。FAP是CAFs的标志性产物之一，有FAPα和FAPβ两个亚单位，固定在反应性成纤维细胞膜上，是含有脯氨酰肽酶的丝氨酸蛋白酶类二聚体，具有分解明胶和Ⅰ型胶原的活性以及类似二肽基肽酶的活性。有研究证明，FAPα主要表达于恶性上皮性肿瘤的基质或间质，以及愈合创面的肉芽组织及生理性重建的器官的成纤维细胞膜上，正常组织中一般无明显表达。FAPα表达具有高度选择性，且具有增生能力。可发挥蛋白酶水解作用， 促进肿瘤微血管生成，促进肿快生长；加速癌细胞增生、浸润、侵袭周围及远处转移。该实验中，通过免疫组化法对60例喉咽鳞癌进行检测，显示FAPα主要表达于肿瘤间质成纤维细胞胞质内，仅少量肿瘤细胞呈阳性表达，正常喉咽组织中FAPα表达呈阴性，这与食道癌组织中FAPα的表达相似。在60例喉咽鳞癌标本中，FAPα在肿瘤间质表达阳性率为88%（44例）。随着肿瘤生长，浸润程度的增加，淋巴结的转移，FAPα的表达明显增加，含量明显增多，其差异有统计学意义（P<0.01）。据学者研究发现，食管胃交界腺癌中CAFs的FAPα含量明显增加，且与肿瘤直径、分化程度、浸润深度、淋巴结转移数目等临床病理参数相关。该试验未观察到FAPα的变化与病理分级有关，我们会在后续的研究中更加关注这一指标的变化。

综上所述，喉咽鳞癌组织中，FAPα表达明显增强伴随着肿瘤的侵袭及转移过程。因此，检测FAPα对了解喉咽鳞癌的发生，评估区域性淋巴结有无转移，探讨手术方法，以及预后判断均具有一定的临床指导意义。随着免疫组化、CLSM透射电镜等技术的发展和分子生物学理论的重大突破，将进一步揭示成纤维细胞在喉咽鳞癌预后转移中的作用，喉咽鳞癌的治疗也许会找到新的突破点。

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（收稿日期：2013-12-24）